Изучение технологических и физико-химических свойств гомеопатических препаратов Chelidonium /В. А. Соболева, Л. Ю. Клименко/

Зеленин Ю. В.

В. А. Соболева, Л. Ю. Клименко
Национальная фармацевтическая академия Украины, кафедра аптечной технологии лекарств, г. Харьков
(Провизор №16 2001г.)

Интенсивное развитие медицины и фармации в последние годы способствует возрастанию внимания врачей и фармацевтов к ряду оригинальных направлений медицины, в частности к гомеопатии.

Длительное время даже в так называемой просвещенной Европе гомеопатия находилась на нелегальном положении. Практикующих врачей лишали возможности вести прием, если появлялись данные об их причастности к гомеопатии. И хотя родиной гомеопатии принято считать Германию, откуда был родом ее основоположник Самуил Ганеман, своим вторым рождением она обязана Америке. Именно в США впервые появились официально зарегистрированные гомеопатические препараты.

Считается, что основа механизма действия гомеопатических средств лежит на уровне биофизических процессов, и поэтому качество их определяется в первую очередь соблюдением методики приготовления — надлежащее время растираний и встряхиваний, последовательность разведения и т. д., что достигается обязательным приготовлением препарата вручную. В XIX веке в США были предприняты попытки механизировать процесс приготовления дилюций. Но после контроля качества этих препаратов более точными физико-химическими методами было показано, что, например, разведение ×10 с помощью машины соответствует разведению ×3, приготовленному вручную.

После официального разрешения гомеопатии в Украине практически сразу же были развернуты масштабные исследования с целью разработки нормативно-технической документации на гомеопатические препараты, включающей контроль качества именно по физико-химическим параметрам. Связано это и с тем широким ассортиментом гомеопатических препаратов, как зарубежных, так и отечественных фирм, который представлен в настоящее время в аптеках Украины. Традиционно качество гомеопатических препаратов регламентируется “Руководством по приготовлению гомеопатических средств” Вильмара Швабе, но в нем описывается в основном контроль качества для базисных препаратов, мы же зачастую имеем дело с препаратами в различных разведениях.

Подобные исследования гомеопатических средств ведутся в Национальной фармацевтической академии Украины на кафедре аптечной технологии лекарств с курсом гомеопатии. Особое внимание уделяется физико-химическому анализу содержания биологически активных веществ в различных препаратах из растительного и животного сырья.

Целью наших исследований является подробное изучение препаратов из чистотела обыкновенного и, исходя из данных, полученных нами ранее при исследовании базисного гомеопатического препарата Chelidonium, подбор наиболее чувствительных качественных реакций и наиболее оптимальных методов хроматографирования и систем растворителей, которые могут быть применены в экспресс-анализе для внедрения их в дальнейшем в практику аптек и контрольно-аналитических лабораторий.

Нами приготовлены матричная настойка Chelidonium (согласно §3 руководства В. Швабе) из свежего сырья, тинктура ×1 (из настойки), дилюции до четвертого десятичного разведения, насыщенные гранулы ×3, тритурация ×1 и 5% мазь. Для проведения физико-химического анализа из мази, гранул и тритурации получали спиртовые извлечения. Как уже сообщалось [5], нами был проведен контроль качества матричной настойки Chelidonium по основным технологическим параметрам: плотность, концентрация спирта, содержание экстрактивных веществ, окраска, вкус, запах и капиллярно-люминесцентный анализ [2, 6, 9]. Результаты показали, что по технологическим свойствам базисный препарат отвечает требованиям частной статьи [9].

Аналогично были проверены технологические свойства приготовленных гомеопатических препаратов из чистотела обыкновенного. В таблице 1 представлена сравнительная характеристика зон, полученных в ходе капиллярно-люминесцентного анализа для матричной настойки Chelidonium и тинктуры ×1.

Таблица 1

Результаты капиллярно-люминесцентного анализа гомеопатических препаратов Chelidonium

Матричная настойка			Тинктура ×1
зона и ее размер	окраска в дневном свете	окраска в УФ-свете	зона и ее размер	окраска в дневном свете	окраска в УФ-свете
1 зона - 0,4 см	светло-коричневая, прозрачная	зеленая с голубыми краями, прозрачная	1 зона - 0,3 см	буровато-серая, прозрачная	грязно-зеленая, прозрачная
2 зона - 0,8 см	коричнево-желтая, прозрачная	зелено-бурая, прозрачная	2 зона - 0,8 см	светло-коричневая, прозрачная	желто-бурая, прозрачная
3 зона - 4,0 см	коричнево-желтая, прозрачная	светло-желтая, прозрачная	3 зона - 0,8 см	кремовая, непрозрачная	грязно-синяя, непрозрачная
4 зона - 0,4 см	светло-коричневая, непрозрачная	желтая, непрозрачная	4 зона - 2,7 см	кремовая, непрозрачная	ярко-желтая, непрозрачная
5 зона - 4,2 см	грязно-зеленая, непрозрачная	желтая, непрозрачная	5 зона - 4,0 см	белая, непрозрачная	желтая, непрозрачная
6 зона - 0,3 см	желтая, непрозрачная	темно-коричневая, непрозрачная	6 зона - 0,4 см	белая, непрозрачная	бурая, непрозрачная
основание - 0,3 см	желтая, непрозрачная	желтая, непрозрачная	основание - 0,6 см	белая, непрозрачная	желтая, непрозрачная
высота подъема 10,4 см			высота подъема 9,6 см

Необходимо отметить, что анализ лекарственного средства только по технологическим параметрам не всегда является вполне достоверным. Поэтому основное внимание уделялось химическому анализу гомеопатических препаратов Chelidonium.

В предыдущих исследованиях [5] нами было подтверждено наличие в матричной настойке тех классов биологически активных веществ, которые, исходя из данных, приведенных в научной литературе, накапливаются в чистотеле в процессе развития — алкалоиды, флавоноиды, сапонины, органические кислоты и различные азотсодержащие соединения.

В данной работе приведены результаты исследований по обнаружению этих классов природных соединений в различных гомеопатических препаратах Chelidonium.

Изучение химического состава исследуемых объектов проводилось с помощью качественных реакций на различные группы биологически активных веществ, а также с помощью хроматографических методов анализа [4, 7, 8].

С помощью качественных реакций было подтверждено наличие следующих групп природных соединений:

• алкалоиды: применялись реакции Вагнера и Бушарда, Драгендорфа, Зоннешейна, реакции с кремневольфрамовой и пикриновой кислотами — положительные результаты отмечались в извлечениях из тритурации ×1 и мази, а также в тинктуре ×1 и дилюции ×2;
• флавоноиды: были проведены реакции с треххлористой сурьмой, спиртовым раствором гидроксида калия, раствором аммиака, хлоридом окисного железа, 1% раствором ванилина в концентрированной соляной кислоте и раствором ацетата свинца — данная группа биологически активных веществ присутствует в тинктуре ×1, извлечениях из тритурации и мази, дилюции ×2, а реакции со спирто-водным раствором гидроксида калия и ацетатом свинца дали положительный результат в извлечении из гранул ×3 и дилюции ×3;
• сапонины обнаруживали реакциями Лафона и Сальковского, а также реакциями с нитратом натрия в концентрированной серной кислоте, ванилинсерным реактивом и раствором ацетата свинца — наличие сапонинов подтверждалось в тинктуре ×1, извлечениях из тритурации и мази, дилюции ×2, а наиболее чувствительная реакция — с раствором ацетата свинца — давала результат и с извлечениями из гранул ×3 и дилюцией ×3.

Следует отметить, что наиболее четкая картина качественного определения наблюдается только после упаривания и сгущения дилюций и извлечений из гранул, мази и тритурации.

Хроматографическое обнаружение указанных групп природных соединений проводилось методами тонкослойной хроматографии, круговой и восходящей хроматографии на бумаге [2, 4, 7, 8]. Исходя из данных, полученных при хроматографировании матричной настойки, были определены системы растворителей, дающие наиболее четкое разделение всех фракций биологически активных веществ.

Для анализа фенольных соединений были применены: хроматография на пластинках с закрепленным слоем сорбента “Silufol UV-254” и “Armsorb” и круговая хроматография на бумаге в системах растворителей н-бутанол—уксусная кислота—вода (4:1:2) и 15% уксусная кислота; восходящая бумажная хроматография в системе БУВ (4:1:2).

Хроматографирование проводили в присутствии “свидетелей” — длина пробега составляла 11 см при ТСХ, 21,5 см при восходящей хроматографии на бумаге и 5,5 см — при круговой бумажной хроматографии. Хроматограммы высушивали и исследовали в дневном и УФ-свете до и после проявления парами аммиака, 10% водно-спиртовым раствором гидроксида калия и 1% спиртовым раствором алюминия хлорида. Были обнаружены от 2 до 7 веществ фенольного характера в матричной настойке, 3 вещества в тинктуре ×1 и одно вещество в дилюции ×2. Наиболее точные и достоверные результаты были получены при использовании метода круговой хроматографии на бумаге. После сравнения значений Rf и окраски пятен с этими же данными для “свидетелей” можно говорить о присутствии гликозидов кверцетина и оксикоричных кислот. Более подробные результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты хроматографического определения фенольных соединений в препаратах Chelidonium методом круговой хроматографии на бумаге

	№ пятен	Значения Rf в системе 15% уксусной к-ты	Цвет пятен после проявления парами аммиака (в УФ-свете)	Значения Rf в системе БУВ (4:1:2)	Цвет пятен после проявления парами аммиака (в УФ-свете)
Матричная настойка	1	0,04	розовый	0,35	лимонно-желтый
	2	0,13	лимонно-желтый	0,43	ярко-желтый
	3	0,31	ярко-желтый	0,46	желтый
	4	0,35	бурый	0,55	бурый
	5	0,51	желтый	0,64	ярко-голубой
	6	0,66	ярко-голубой	0,70	розовый
	7	0,70	голубой	0,82	голубой
Тинктура ×1	1	0,04	розовый	0,35	лимонно-желтый
	2	0,13	лимонно-желтый	0,43	ярко-желтый
	3	0,31	ярко-желтый	0,70	розовый
Дилюция ×2	1	0,31	ярко-желтый	0,43	ярко-желтый
Кверцетин		0,03	ярко-желтый	0,68	ярко-желтый
Кемпферол		0,04	лимонно-желтый	0,81	лимонно-желтый
Лютеолин		0,05	лимонно-желтый	0,86	лимонно-желтый
Гиперозид		0,35	бурый	0,55	бурый
Рутин		0,52	желтый	0,15	желтый
Хлорогеновая к-та		0,66	ярко-голубой	0,63	ярко-голубой
Кофейная к-та		0,70	голубой	0,82	голубой

Хроматографическое исследование алкалоидов и сапонинов проводилось методом ТСХ на пластинках “Silufol UV-254” и “Armsorb”. При анализе использовались системы растворителей хлороформ–этанол (9:1) и бутанол, насыщенный водой—ледяная уксусная кислота (100:5) — для алкалоидов и изопропанол—вода—хлороформ (30:10:5) — для сапонинов. Проявление хроматограмм проводили парами йода — для обнаружения алкалоидов и спиртовым раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты — для определения сапонинов.

Алкалоиды, предварительно переведенные из солей в основания, обнаруживались в виде коричнево-фиолетовых пятен в тинктуре ×1 и дилюции ×2 и извлечениях из мази и тритурации. Наличие сапонинов подтвердилось в тинктуре ×1 и дилюции ×2. Проявлялась данная группа БАВ в виде темно-зеленых пятен со значениями Rf 0,22 и 0,77.

Ранее [5] нами было подтверждено присутствие в матричной настойке Chelidonium аминокислот. Результаты этого анализа представлены в таблице 3. Хроматографирование проводилось с использованием методов ТСХ и восходящей бумажной хроматографии в системах растворителей н-бутанол—уксусная кислота—вода (4:1:2), этанол—вода (95:5), изопропанол—уксусная кислота—вода (75:15:10) в присутствии стандартных образцов аминокислот. Проявляли хроматограммы 0,2% спиртовым раствором нингидрина и выдерживали в термостате при 100–105°С в течение 15 минут. Аминокислоты проявлялись в виде розово-фиолетовых и фиолетовых пятен различной интенсивности окраски. Предварительно были идентифицированы некоторые свободные аминокислоты (аспарагин, аргинин, аспарагиновая кислота, глицин, валин, триптофан, норвалин, α-фенилаланин и β-фенилаланин). Предпринятые попытки обнаружить аминокислоты в гомеопатических препаратах Chelidonium давали 3 пятна в тинктуре ×1, 2 пятна в дилюции ×2 и по 1 пятну в извлечениях из тритурации и мази. Однако следует иметь в виду, что некоторые аминокислоты имеют близкие значения Rf и схожую окраску пятен, на результаты анализа также оказывает влияние наличие в сырье коротких полипептидов, значения Rf которых могут совпадать с этими величинами для свободных аминокислот.

Таблица 3

Результаты хроматографического исследования аминокислотного состава препаратов Chelidonium методом восходящей бумажной хроматографии в системе н-бутанол—уксусная кислота—вода (4:1:2)

	№ пятен	Значения Rf	Цвет пятен после проявления 0,2% спиртовым раствором нингидрина
Матричная настойка	1	0,16	фиолетовый
	2	0,21	светло-фиолетовый
	3	0,26	сиреневый
	4	0,36	желтовато-фиолетовый
	5	0,38	фиолетовый
	6	0,43	желто-фиолетовый
	7	0,53	желто-коричневый
	8	0,63	бурый
	9	0,74	розовый
	10	0,78	розово-фиолетовый
Орнитин		0,12	фиолетовый
Аспарагин		0,16	фиолетовый
Аргинин		0,21	светло-фиолетовый
Аспарагиновая к-та		0,22	светло-фиолетовый
Глицин		0,26	сиреневый
Серин		0,27	желто-коричневый
Глутаминовая к-та		0,31	фиолетовый
Треонин		0,33	розовый
Аланин		0,43	желто-фиолетовый
Валин		0,62	бурый
Триптофан		0,63	бурый
Норвалин		0,64	бурый
α-фенилаланин		0,74	розовый
β-фенилаланин		0,78	розово-фиолетовый

Подводя итог данного этапа исследований, можно предложить для анализа гомеопатических препаратов Chelidonium в условиях аптек и контрольно-аналитических лабораторий следующие рекомендации:

• для проведения качественных реакций и хроматографирования препараты рекомендуется упаривать на водяной бане для более четкой картины анализа;
• при качественном анализе БАВ в базисном препарате и лекарственных формах на его основе целесообразно использовать для обнаружения алкалоидов реакцию с раствором пикриновой кислоты, на флавоноиды — реакцию со спиртовым раствором гидроксида калия или раствором аммиака, для подтверждения наличия сапонинов — реакцию с раствором ацетата свинца;
• при исследовании состава флавоноидов — круговую бумажную хроматографию в системах БУВ (4:1:2) и 15% уксусная кислота, что сокращает время анализа до 25–30 минут;
• с целью подтверждения аминокислотного состава — восходящую бумажную хроматографию в системе БУВ (4:1:2) или ТСХ в системе этанол–вода (95:5) как дающие наиболее достоверные результаты.

Выводы

1. Проведено исследование технологических свойств и химического состава гомеопатических препаратов Chelidonium.
2. Определены наиболее чувствительные реакции для обнаружения действующих веществ.
3. Подобраны наиболее оптимальные методы хроматографирования, системы растворителей и условия проведения анализа.
4. Полученные данные могут быть использованы (после апробации в условиях аптек и контрольно-аналитических лабораторий) при разработке нормативно-технической документации на гомеопатические препараты из чистотела обыкновенного.

Литература

1. Георгиевский В. П., Комиссаренко Н. Ф., Дмитрук С. Е. Биологически активные вещества лекарственных растений.— М.: Наука, 1990.— 333 с.
2. Государственная фармакопея СССР. 11 изд. — М.: Медицина, 1987.— Т. 1.— 334 с.
3. Лікарські рослини: енциклопедичний довідник /За ред. акад. А. М. Гродзинського.— К.: Вид-во “Українська енциклопедія”, 1992.— 104 с.
4. Методические указания по анализу лекарственных средств растительного происхождения.— Киев, 1986.— 16 с.
5. Соболева В. А., Клименко Л. Ю. Применение и исследование технологических и физико-химических свойств базисного гомеопатического препарата Chelidonium // Провизор.— 2000.— № 18.— С. 28–30.
6. Справочник провизора-аналитика /Под ред. Д. С. Волоха, Н. П. Максютиной.— К.: Здоров’я, 1989.— С. 48–49.
7. Хроматография на бумаге / Под ред. И. М. Хайса и К. Мацека: Пер. с чешского / Под ред. канд. биол. наук М. Н. Запрометова.— М.: Изд-во иностранной литературы, 1962.— 852 с.
8. Шаршунова М., Шварц В., Михалец И. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии.— М.: Мир, 1980.— Т. 2.— 535 с.
9. Швабе В. Гомеопатические лекарственные средства: Пер. с нем. /Под ред. В. И. Рыбака.— М.: Б. И., 1967.— 373 с.