Т 3- IФА
ООО НПЛ "Гранум"
Інструкція
по використанню тест-системи імуноферментної
для визначення загального трийодтиронина в сироватцi та плазмi кровi
(Т 3- IФА)
Державний реєстраційний номер № 1247/2002
Тiльки для дiагностики in vitro
Набiр вироблений по технологiї та з компонентiв фiрми Хема-Медiка, Москва.
Введення
Трийодтиронин (3,5,3-трийодотиронин або Т3) - гормон щитовидної залози з молекулярною масою 651 Да. 20% Т3 виробляється в щитовидній залозі, а решта 80% створюється в результаті конверсії тироксину (Т4) у периферичних тканинах. Період напіврозпаду Т3 дорівнює приблизно одній добі. У вільній формі знаходиться приблизно 0,5% Т3, а решта гормону зв’язана з тими ж сироватковими білками, що і Т4, але істотно слабкіше. Т3 має більш високу біологічну активність чим Т4, так що бiльшiсть біологічних ефектів гормонів щитовидної залози реалізуються через дію Т3. Т3 ингібірує секрецію ТТГ за принципом негативного зворотного зв’язку.
Показання до визначення Т3: діагностика порушень функцій щитовидної залози; гіпертиреоз, порушення єднальної ємності білків (рівень Т3 підвищений); гіпотиреоз (рівень Т3 знижений);
контроль проведеної терапії.
Принцип визначення
У наданiй тест-системi використовується принцип конкурентного iмуноферментного аналiзу. У лунки мiкропланшета, на поверхнi якого адсорбованi специфiчнi анти-Т3-антитiла, вносять дослiджуваний зразок та кон'югат Т3-пероксидаза. Т3 iз зразка конкурує з кон'югованим антигеном за зв'язок з антитiлами на поверхнi лунки. Aктивнiсть ферменту, зв'язаного на поверхнi лунки мiкропланшету, проявляється i вимiрюється додаванням хромоген-субстратної сумiшi, стоп-розчину та фотометрiєю при 450 нм. Iнтенсивнiсть кольорової реакцiї зворотньо пропорцiйна кiлькостi специфiчних антитiл у зразку.
1. Анти-Т3 IФА стрипи, 8х12 лунок (1 ш.)
2. Стрічка для закліювання стрипів ( 2 шт.)
3. Набiр калiбраторiв та контролiв, по 0.5 мл (всього 5 калiбраторiв: 0; 0.75; 1.5; 7.5; 15 нмоль/л; та 1 контрольний зразок)
4. Концентрат вiдмиваючого розчина, 22 мл ( 1 фл.)
5. Кон'югат, 5.2 мл ( 1 фл.)
6. Субстрат , 11 мл ( 1 фл.)
7. Стоп-розчин, 11 мл ( 1 фл.)
Важливі зауваження по збереженню реагентів і виконанню тесту.
1. Не змішуйте і не використовуйте в одній постановці реагенти різних серій.
2. Після використання реагенту негайно закривайте кришку флакона чи пробірки. Увага: закривайте кожен флакон своєю кришкою.
3. Усі компоненти набору повинні зберігатися в холодильнику (+2...+8оС). Не заморожуйте набір.
4. Після розкриття пакета ретельно заклейте лунки, що залишилися, стрічкою для закліювання,яка входить до складу набору, щоб запобігти впливу вологи пiд час зберiгання.
5. Увага! Під час всіх інкубацій необхідно заклеювати планшет клейкою стрічкою. Не допускайте пересихання лунок мікропланшета між стадіями постановки.
6. Усі проби і стандарти бажано ставити в двох паралелях (повторах).
7. Досліджувані сироватки повинні бути ретельно отцентрифуговані. Не використовуйте мутні, хильозні та гемолітичні зразки.
8. Якщо аналіз виробляється не в день узяття крові, сироватку варто зберігати при -200С. Повторне заморожування-відтавання не допускається.
9.Відмивання мікропланшета може проводитися як вручну, так і з використанням автоматичних пристроїв. Вносите не менш 200 мкл відмивочного буфера у лунки при кожному відмиванні. Затримка при відмиванні («замочування») не потрібна. Після закінчення ручного відмивання різко перегорнiть мікропланшет на фільтрувальний папір для видалення залишків буфера.
10. Вимірюйте оптичну щільність протягом не більш 15 хвилин після зупинки реакції
Підготовка реагентів
1. Усі реагенти (включаючи необхідне число стрипів) перед використанням повинні бути доведені до кімнатної температури (20-25°С).
2. Приготуйте відмиваючий розчин: для цього концентрат ,розбавте 10-кратним об’ємом дистильованої води в чистому посуді.
Проведення аналiзу
1. Помістiть у рамку потрібна кількість стрипів - зразки в 2 повторах та 12 лунок для калiбраторiв та контрольних зразкiв.
2. Внесiть у лунки по 50 мкл калiбратора або дослiджуваного зразка.
3. Внесiть у лунки по 50 мкл розчина кон'югату.
4. Інкубуйте 30 хвилин при температурi 20-25°C.
5. Вiдмийте стрипи 5 разiв вiдмиваючим розчином.
6. Внесiть у лунки 100 мкл субстратного розчину.
7. Iнкубуйте 15 хвилин при температурi 20-25°C.
8. Внесiть у лунки 100 мкл стоп-розчину.
10. Визначте оптичну щільність у лунках на фотометрі при довжині хвилі 450 нм. Бланк фотометра виставляйте проти повітря.
Приклад калібровочної кривої ( вісь Х – конц.; вісь У – ОЩ нмоль/л )
Очикуванні коливання контрольного зразка : 1 – 2 нмоль/л
Нормальні величини
Грунтуючись на результатах досліджень, проведених лабораторiями, рекомендуємо користатися нормами, приведеними нижче. Разом з тим, відповідно до правил GLP (Гарної лабораторної практики), кожна лабораторія повинна сама визначити для себе параметри норми, характерні для обстежуваної популяції.
Донори : 1,2 – 3,2 нмоль/л.( 0,8 – 2,1 нг/мл)
1. Набор призначений тільки для діагностики in vitro. Категорично забороняється піпетування ротом.
2. Засобами індивідуального захисту при роботі з наборами є марлеві пов’язки та гумові рукавички.
3. Знезараження сироваток проводити згiдно з наказом МОЗ СРСР №408 вiд 29.12.89 р. «О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране».
Умови транспортування
1. Набори транспортують всіма видами закритого транспорту при температурі від +4 до +100С. Допускається транспортування при температурі до +370С не більше 72 годин.
2. Набори повинні зберігатися при температурі від +4 до +100С. Не допускається замороження!
Гарантії виробника
1. Виробник гарантує відповідність якості наборів вимогам цих ТУ при додержанні споживачем наведених у них умов транспортування та зберігання.
2. Гарантійний термін зберігання становить 6 місяців від дня виготовлення набору. Після закінчення терміну зберігання набори підлягають переконтролю з метою перевірки їх працездатності.
3. Термін придатності стрипів після розкриття пакету становлює 1 місяць при температурі +2...+8˚С. Невикористані стрипи зберігають у щільно закритому пакеті!
Все права защищены.