Главная
/
Медицинские публикации
/
Авторы
/
ООО НПЛ "Гранум"
/
Альбумін – ІФА
Інструкція
по використанню тест-системи імуноферментної
для визначення концентрації альбуміну в сечі людини
( “Альбумін – ІФА” )
Державний реєстраційний номер № 1247/2002
Мікроальбумінурія (рівень екскреції альбуміна з сечею), яка перевищує допустимі нормальні значення, але не досягає ступеню протеїнурії, є єдиним лабораторним показником, який дозволяє визначити доклінічні стадії діабетичної нефропатії.
Принцип методу
Оснований на виявлені в cечі людини сироваткового альбуміну за допомогою специфічного антиальбумінового кон’югату (анти-ЧСА). Компоненти, що не зв’язалися, відмиваються, а активність ферменту в складі імунних комплексів визначають з допомогою субстрат – хромогенної суміші. Інтенсивність покрашення хромогену зворотньо пропорційна концентрації альбуміну в зразку.
Склад набору
1. Планшет полістироловий з імобілізованим антигеном (1 шт).
2. Калібратори (1 упак.).
3. Буфер фосфатно-сольовий (ФСБ) (1 флакон).
4. Цитратно-фосфатний буфер (ЦФБ) (1 флакон).
5. Розчин субстрату (1 флакон).
6. Кон’югат, мічений пероксидазою (1 флакон).
7. Зупиняючий розчин (1 флакон).
Досліджуваний матеріал
З добової сечі, зібраної по Нечипоренко, відбирають 1 мл. Зберігають зразки не більше 24 годин при +2+80С. Довгострокове зберігання допускається в замороженому вигляді при температурі мінус 200С. Повторні заморозка та розтавання не рекомендуються.
Підготовка реагентів
1. Перед постановкою дослідження набор витримують при кімнатній температурі протягом 30 хвилин.
2. Готують необхідну кількість розчину ФСБ, для чого розводять його в 10 раз дистильованою водою. При випаданні солі в осад в концентраті необхідно прогріти його при 30-40°С до повного розчинення осаду. Приготовлений розчин використовують для розведення сечі, кон’югату та промивання планшетів.
3. Підготовка робочого розчину кон’югату: 200 мкл розводять в 10 мл ФСБ. При постановці реакції тільки на частині планшету кількість кон'югату зменшується пропорційно. Робочий розчин кон’югату готують безпосередньо перед використанням!
4. Підготовка субстратної суміші: до 9 мл дистильованої води добавляють 1мл концентрованого ЦФБ і 1 мл ТМБ-розчину. При постановці реакції тільки на частині планшету кількість субстратної суміші зменшується пропорційно. Робочий розчин субстратної суміші готують безпосередньо перед використанням!
Проведення дослідження
1. В ямки необхідної кількості стипів вносять по 90 мкл розчину ФСБ.
2. В ямки всіх стрипів з ФСБ вносять послідовно в 2-х повторах по 10 мкл калібровочних розчинів, починаючи з 0 мкг/мл, та досліджуваних зразків. Безпосередньо після цього в усі ямки вносять по 100 мкл робочого розчину кон’югату.
3. Планшет інкубують протягом 60 хв при кімнатній температурі, періодично струшуючи, або на шейкері.
4. Після інкубації планшет промивають 4-5 разів ФСБ, добавляючи в ямки по 200 мкл розчину.
5. В ямки промитого планшету вносять по 100 мкл субстратної суміші і інкубують в захищеному від світла місці 15-20 хвилин в залежності від ступеню розвитку окрасу. Зупиняють реакцію добавлянням в кожну ямку планшету по 100 мкл зупиняючого реагенту.
6.Не більше як через 5-10 хвилин міряють оптичну щільність в ямках планшету на аналізаторі імуноферментному при довжині хвилі 450 нм.
Оцінка результатів дослідження
Міряють оптичну щільність (ОЩ) в усіх ямках. Визначають кількість альбуміну в досліджуваних зразках по графіку, побудованому по калібровочним зразкам. В нормі екскреція альбуміну не перевищує 30 мг в сутки, що відповідає 20 мг/л. Діапазоном для мікроальбумінурії є екскреція альбуміну від 30 до 300 мг/сут. У випадках, коли екскреція з сечею альбуміну перевищує 300 мг/сут, говорять про протеїнурію.
Вимоги безпеки
1. Набор призначений тільки для діагностики in vitro. Категорично забороняється піпетування ротом.
2. Засобами індивідуального захисту при роботі з наборами є марлеві пов’язки та гумові рукавички.
3. Знезараження сироваток проводити згiдно з наказом МОЗ СРСР №408 вiд 29.12.89 р. «О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране».
Умови транспортування та зберігання
1 Набори транспортують всіма видами закритого транспорту при температурі від +4 до +100С. Допускається транспортування при температурі до +370С не більше 72 годин.
2 Набори повинні зберігатися при температурі від +4 до +100С. Не допускається замороження!
Гарантії виробника
1 Виробник гарантує відповідність якості наборів вимогам цих ТУ при додержанні споживачем наведених у них умов транспортування та зберігання.
2 Гарантійний термін зберігання становить 6 місяців від дня виготовлення набору. Після закінчення терміну зберігання набори підлягають переконтролю з метою перевірки їх працездатності
.3 Термін придатності стрипів після розкриття пакету становлює 1 місяць при температурі 2-8˚ С. Невикористані стрипи зберігають у щільно закритому пакеті!
Увага!
1. Перед постановкою дослідження набор витримати при кімнатній температурі протягом 30 хв.
2. Перед роботою розкрити пакет, відрізавши запаяну смугу. Діставши необхідну кількість стрипів, щільно закрити за допомогою застібки (“зіпера”) для запобігання утворення конденсату та попадання вологи.
|
