❶Главная
/
❷Медицинские публикации
/
❸Гомеопатия
/
❹Харьковское...
/
❺Для...
/
Изучение технологических и физико-химических свойств гомеопатических препаратов Chelidonium /В. А. Соболева, Л. Ю. Клименко/
В. А. Соболева, Л. Ю. Клименко Национальная фармацевтическая академия Украины, кафедра аптечной технологии лекарств, г. Харьков (Провизор №16 2001г.)
Интенсивное развитие медицины и фармации в последние годы способствует возрастанию внимания врачей и фармацевтов к ряду оригинальных направлений медицины, в частности к гомеопатии.
Длительное время даже в так называемой просвещенной Европе гомеопатия находилась на нелегальном положении. Практикующих врачей лишали возможности вести прием, если появлялись данные об их причастности к гомеопатии. И хотя родиной гомеопатии принято считать Германию, откуда был родом ее основоположник Самуил Ганеман, своим вторым рождением она обязана Америке. Именно в США впервые появились официально зарегистрированные гомеопатические препараты.
Считается, что основа механизма действия гомеопатических средств лежит на уровне биофизических процессов, и поэтому качество их определяется в первую очередь соблюдением методики приготовления — надлежащее время растираний и встряхиваний, последовательность разведения и т. д., что достигается обязательным приготовлением препарата вручную. В XIX веке в США были предприняты попытки механизировать процесс приготовления дилюций. Но после контроля качества этих препаратов более точными физико-химическими методами было показано, что, например, разведение ×10 с помощью машины соответствует разведению ×3, приготовленному вручную.
После официального разрешения гомеопатии в Украине практически сразу же были развернуты масштабные исследования с целью разработки нормативно-технической документации на гомеопатические препараты, включающей контроль качества именно по физико-химическим параметрам. Связано это и с тем широким ассортиментом гомеопатических препаратов, как зарубежных, так и отечественных фирм, который представлен в настоящее время в аптеках Украины. Традиционно качество гомеопатических препаратов регламентируется “Руководством по приготовлению гомеопатических средств” Вильмара Швабе, но в нем описывается в основном контроль качества для базисных препаратов, мы же зачастую имеем дело с препаратами в различных разведениях.
Подобные исследования гомеопатических средств ведутся в Национальной фармацевтической академии Украины на кафедре аптечной технологии лекарств с курсом гомеопатии. Особое внимание уделяется физико-химическому анализу содержания биологически активных веществ в различных препаратах из растительного и животного сырья.
Целью наших исследований является подробное изучение препаратов из чистотела обыкновенного и, исходя из данных, полученных нами ранее при исследовании базисного гомеопатического препарата Chelidonium, подбор наиболее чувствительных качественных реакций и наиболее оптимальных методов хроматографирования и систем растворителей, которые могут быть применены в экспресс-анализе для внедрения их в дальнейшем в практику аптек и контрольно-аналитических лабораторий.
Нами приготовлены матричная настойка Chelidonium (согласно §3 руководства В. Швабе) из свежего сырья, тинктура ×1 (из настойки), дилюции до четвертого десятичного разведения, насыщенные гранулы ×3, тритурация ×1 и 5% мазь. Для проведения физико-химического анализа из мази, гранул и тритурации получали спиртовые извлечения. Как уже сообщалось [5], нами был проведен контроль качества матричной настойки Chelidonium по основным технологическим параметрам: плотность, концентрация спирта, содержание экстрактивных веществ, окраска, вкус, запах и капиллярно-люминесцентный анализ [2, 6, 9]. Результаты показали, что по технологическим свойствам базисный препарат отвечает требованиям частной статьи [9].
Аналогично были проверены технологические свойства приготовленных гомеопатических препаратов из чистотела обыкновенного. В таблице 1 представлена сравнительная характеристика зон, полученных в ходе капиллярно-люминесцентного анализа для матричной настойки Chelidonium и тинктуры ×1.
Таблица 1
Результаты капиллярно-люминесцентного анализа гомеопатических препаратов Chelidonium
Матричная настойка |
Тинктура ×1 |
зона и ее размер |
окраска в дневном свете |
окраска в УФ-свете |
зона и ее размер |
окраска в дневном свете |
окраска в УФ-свете |
1 зона - 0,4 см |
светло-коричневая, прозрачная |
зеленая с голубыми краями, прозрачная |
1 зона - 0,3 см |
буровато-серая, прозрачная |
грязно-зеленая, прозрачная |
2 зона - 0,8 см |
коричнево-желтая, прозрачная |
зелено-бурая, прозрачная |
2 зона - 0,8 см |
светло-коричневая, прозрачная |
желто-бурая, прозрачная |
3 зона - 4,0 см |
коричнево-желтая, прозрачная |
светло-желтая, прозрачная |
3 зона - 0,8 см |
кремовая, непрозрачная |
грязно-синяя, непрозрачная |
4 зона - 0,4 см |
светло-коричневая, непрозрачная |
желтая, непрозрачная |
4 зона - 2,7 см |
кремовая, непрозрачная |
ярко-желтая, непрозрачная |
5 зона - 4,2 см |
грязно-зеленая, непрозрачная |
желтая, непрозрачная |
5 зона - 4,0 см |
белая, непрозрачная |
желтая, непрозрачная |
6 зона - 0,3 см |
желтая, непрозрачная |
темно-коричневая, непрозрачная |
6 зона - 0,4 см |
белая, непрозрачная |
бурая, непрозрачная |
основание - 0,3 см |
желтая, непрозрачная |
желтая, непрозрачная |
основание - 0,6 см |
белая, непрозрачная |
желтая, непрозрачная |
высота подъема 10,4 см |
высота подъема 9,6 см |
Необходимо отметить, что анализ лекарственного средства только по технологическим параметрам не всегда является вполне достоверным. Поэтому основное внимание уделялось химическому анализу гомеопатических препаратов Chelidonium.
В предыдущих исследованиях [5] нами было подтверждено наличие в матричной настойке тех классов биологически активных веществ, которые, исходя из данных, приведенных в научной литературе, накапливаются в чистотеле в процессе развития — алкалоиды, флавоноиды, сапонины, органические кислоты и различные азотсодержащие соединения.
В данной работе приведены результаты исследований по обнаружению этих классов природных соединений в различных гомеопатических препаратах Chelidonium.
Изучение химического состава исследуемых объектов проводилось с помощью качественных реакций на различные группы биологически активных веществ, а также с помощью хроматографических методов анализа [4, 7, 8].
С помощью качественных реакций было подтверждено наличие следующих групп природных соединений:
- алкалоиды: применялись реакции Вагнера и Бушарда, Драгендорфа, Зоннешейна, реакции с кремневольфрамовой и пикриновой кислотами — положительные результаты отмечались в извлечениях из тритурации ×1 и мази, а также в тинктуре ×1 и дилюции ×2;
- флавоноиды: были проведены реакции с треххлористой сурьмой, спиртовым раствором гидроксида калия, раствором аммиака, хлоридом окисного железа, 1% раствором ванилина в концентрированной соляной кислоте и раствором ацетата свинца — данная группа биологически активных веществ присутствует в тинктуре ×1, извлечениях из тритурации и мази, дилюции ×2, а реакции со спирто-водным раствором гидроксида калия и ацетатом свинца дали положительный результат в извлечении из гранул ×3 и дилюции ×3;
- сапонины обнаруживали реакциями Лафона и Сальковского, а также реакциями с нитратом натрия в концентрированной серной кислоте, ванилинсерным реактивом и раствором ацетата свинца — наличие сапонинов подтверждалось в тинктуре ×1, извлечениях из тритурации и мази, дилюции ×2, а наиболее чувствительная реакция — с раствором ацетата свинца — давала результат и с извлечениями из гранул ×3 и дилюцией ×3.
Следует отметить, что наиболее четкая картина качественного определения наблюдается только после упаривания и сгущения дилюций и извлечений из гранул, мази и тритурации.
Хроматографическое обнаружение указанных групп природных соединений проводилось методами тонкослойной хроматографии, круговой и восходящей хроматографии на бумаге [2, 4, 7, 8]. Исходя из данных, полученных при хроматографировании матричной настойки, были определены системы растворителей, дающие наиболее четкое разделение всех фракций биологически активных веществ.
Для анализа фенольных соединений были применены: хроматография на пластинках с закрепленным слоем сорбента “Silufol UV-254” и “Armsorb” и круговая хроматография на бумаге в системах растворителей н-бутанол—уксусная кислота—вода (4:1:2) и 15% уксусная кислота; восходящая бумажная хроматография в системе БУВ (4:1:2).
Хроматографирование проводили в присутствии “свидетелей” — длина пробега составляла 11 см при ТСХ, 21,5 см при восходящей хроматографии на бумаге и 5,5 см — при круговой бумажной хроматографии. Хроматограммы высушивали и исследовали в дневном и УФ-свете до и после проявления парами аммиака, 10% водно-спиртовым раствором гидроксида калия и 1% спиртовым раствором алюминия хлорида. Были обнаружены от 2 до 7 веществ фенольного характера в матричной настойке, 3 вещества в тинктуре ×1 и одно вещество в дилюции ×2. Наиболее точные и достоверные результаты были получены при использовании метода круговой хроматографии на бумаге. После сравнения значений Rf и окраски пятен с этими же данными для “свидетелей” можно говорить о присутствии гликозидов кверцетина и оксикоричных кислот. Более подробные результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2
Результаты хроматографического определения фенольных соединений в препаратах Chelidonium методом круговой хроматографии на бумаге
|
№ пятен |
Значения Rf в системе 15% уксусной к-ты |
Цвет пятен после проявления парами аммиака (в УФ-свете) |
Значения Rf в системе БУВ (4:1:2) |
Цвет пятен после проявления парами аммиака (в УФ-свете) |
Матричная настойка |
1 |
0,04 |
розовый |
0,35 |
лимонно-желтый |
|
2 |
0,13 |
лимонно-желтый |
0,43 |
ярко-желтый |
|
3 |
0,31 |
ярко-желтый |
0,46 |
желтый |
|
4 |
0,35 |
бурый |
0,55 |
бурый |
|
5 |
0,51 |
желтый |
0,64 |
ярко-голубой |
|
6 |
0,66 |
ярко-голубой |
0,70 |
розовый |
|
7 |
0,70 |
голубой |
0,82 |
голубой |
Тинктура ×1 |
1 |
0,04 |
розовый |
0,35 |
лимонно-желтый |
|
2 |
0,13 |
лимонно-желтый |
0,43 |
ярко-желтый |
|
3 |
0,31 |
ярко-желтый |
0,70 |
розовый |
Дилюция ×2 |
1 |
0,31 |
ярко-желтый |
0,43 |
ярко-желтый |
Кверцетин |
|
0,03 |
ярко-желтый |
0,68 |
ярко-желтый |
Кемпферол |
|
0,04 |
лимонно-желтый |
0,81 |
лимонно-желтый |
Лютеолин |
|
0,05 |
лимонно-желтый |
0,86 |
лимонно-желтый |
Гиперозид |
|
0,35 |
бурый |
0,55 |
бурый |
Рутин |
|
0,52 |
желтый |
0,15 |
желтый |
Хлорогеновая к-та |
|
0,66 |
ярко-голубой |
0,63 |
ярко-голубой |
Кофейная к-та |
|
0,70 |
голубой |
0,82 |
голубой |
Хроматографическое исследование алкалоидов и сапонинов проводилось методом ТСХ на пластинках “Silufol UV-254” и “Armsorb”. При анализе использовались системы растворителей хлороформ–этанол (9:1) и бутанол, насыщенный водой—ледяная уксусная кислота (100:5) — для алкалоидов и изопропанол—вода—хлороформ (30:10:5) — для сапонинов. Проявление хроматограмм проводили парами йода — для обнаружения алкалоидов и спиртовым раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты — для определения сапонинов.
Алкалоиды, предварительно переведенные из солей в основания, обнаруживались в виде коричнево-фиолетовых пятен в тинктуре ×1 и дилюции ×2 и извлечениях из мази и тритурации. Наличие сапонинов подтвердилось в тинктуре ×1 и дилюции ×2. Проявлялась данная группа БАВ в виде темно-зеленых пятен со значениями Rf 0,22 и 0,77.
Ранее [5] нами было подтверждено присутствие в матричной настойке Chelidonium аминокислот. Результаты этого анализа представлены в таблице 3. Хроматографирование проводилось с использованием методов ТСХ и восходящей бумажной хроматографии в системах растворителей н-бутанол—уксусная кислота—вода (4:1:2), этанол—вода (95:5), изопропанол—уксусная кислота—вода (75:15:10) в присутствии стандартных образцов аминокислот. Проявляли хроматограммы 0,2% спиртовым раствором нингидрина и выдерживали в термостате при 100–105°С в течение 15 минут. Аминокислоты проявлялись в виде розово-фиолетовых и фиолетовых пятен различной интенсивности окраски. Предварительно были идентифицированы некоторые свободные аминокислоты (аспарагин, аргинин, аспарагиновая кислота, глицин, валин, триптофан, норвалин, α-фенилаланин и β-фенилаланин). Предпринятые попытки обнаружить аминокислоты в гомеопатических препаратах Chelidonium давали 3 пятна в тинктуре ×1, 2 пятна в дилюции ×2 и по 1 пятну в извлечениях из тритурации и мази. Однако следует иметь в виду, что некоторые аминокислоты имеют близкие значения Rf и схожую окраску пятен, на результаты анализа также оказывает влияние наличие в сырье коротких полипептидов, значения Rf которых могут совпадать с этими величинами для свободных аминокислот.
Таблица 3
Результаты хроматографического исследования аминокислотного состава препаратов Chelidonium методом восходящей бумажной хроматографии в системе н-бутанол—уксусная кислота—вода (4:1:2)
|
№ пятен |
Значения Rf |
Цвет пятен после проявления 0,2% спиртовым раствором нингидрина |
Матричная настойка |
1 |
0,16 |
фиолетовый |
|
2 |
0,21 |
светло-фиолетовый |
|
3 |
0,26 |
сиреневый |
|
4 |
0,36 |
желтовато-фиолетовый |
|
5 |
0,38 |
фиолетовый |
|
6 |
0,43 |
желто-фиолетовый |
|
7 |
0,53 |
желто-коричневый |
|
8 |
0,63 |
бурый |
|
9 |
0,74 |
розовый |
|
10 |
0,78 |
розово-фиолетовый |
Орнитин |
|
0,12 |
фиолетовый |
Аспарагин |
|
0,16 |
фиолетовый |
Аргинин |
|
0,21 |
светло-фиолетовый |
Аспарагиновая к-та |
|
0,22 |
светло-фиолетовый |
Глицин |
|
0,26 |
сиреневый |
Серин |
|
0,27 |
желто-коричневый |
Глутаминовая к-та |
|
0,31 |
фиолетовый |
Треонин |
|
0,33 |
розовый |
Аланин |
|
0,43 |
желто-фиолетовый |
Валин |
|
0,62 |
бурый |
Триптофан |
|
0,63 |
бурый |
Норвалин |
|
0,64 |
бурый |
α-фенилаланин |
|
0,74 |
розовый |
β-фенилаланин |
|
0,78 |
розово-фиолетовый |
Подводя итог данного этапа исследований, можно предложить для анализа гомеопатических препаратов Chelidonium в условиях аптек и контрольно-аналитических лабораторий следующие рекомендации:
- для проведения качественных реакций и хроматографирования препараты рекомендуется упаривать на водяной бане для более четкой картины анализа;
- при качественном анализе БАВ в базисном препарате и лекарственных формах на его основе целесообразно использовать для обнаружения алкалоидов реакцию с раствором пикриновой кислоты, на флавоноиды — реакцию со спиртовым раствором гидроксида калия или раствором аммиака, для подтверждения наличия сапонинов — реакцию с раствором ацетата свинца;
- при исследовании состава флавоноидов — круговую бумажную хроматографию в системах БУВ (4:1:2) и 15% уксусная кислота, что сокращает время анализа до 25–30 минут;
- с целью подтверждения аминокислотного состава — восходящую бумажную хроматографию в системе БУВ (4:1:2) или ТСХ в системе этанол–вода (95:5) как дающие наиболее достоверные результаты.
Выводы
- Проведено исследование технологических свойств и химического состава гомеопатических препаратов Chelidonium.
- Определены наиболее чувствительные реакции для обнаружения действующих веществ.
- Подобраны наиболее оптимальные методы хроматографирования, системы растворителей и условия проведения анализа.
- Полученные данные могут быть использованы (после апробации в условиях аптек и контрольно-аналитических лабораторий) при разработке нормативно-технической документации на гомеопатические препараты из чистотела обыкновенного.
Литература
- Георгиевский В. П., Комиссаренко Н. Ф., Дмитрук С. Е. Биологически активные вещества лекарственных растений.— М.: Наука, 1990.— 333 с.
- Государственная фармакопея СССР. 11 изд. — М.: Медицина, 1987.— Т. 1.— 334 с.
- Лікарські рослини: енциклопедичний довідник /За ред. акад. А. М. Гродзинського.— К.: Вид-во “Українська енциклопедія”, 1992.— 104 с.
- Методические указания по анализу лекарственных средств растительного происхождения.— Киев, 1986.— 16 с.
- Соболева В. А., Клименко Л. Ю. Применение и исследование технологических и физико-химических свойств базисного гомеопатического препарата Chelidonium // Провизор.— 2000.— № 18.— С. 28–30.
- Справочник провизора-аналитика /Под ред. Д. С. Волоха, Н. П. Максютиной.— К.: Здоров’я, 1989.— С. 48–49.
- Хроматография на бумаге / Под ред. И. М. Хайса и К. Мацека: Пер. с чешского / Под ред. канд. биол. наук М. Н. Запрометова.— М.: Изд-во иностранной литературы, 1962.— 852 с.
- Шаршунова М., Шварц В., Михалец И. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии.— М.: Мир, 1980.— Т. 2.— 535 с.
- Швабе В. Гомеопатические лекарственные средства: Пер. с нем. /Под ред. В. И. Рыбака.— М.: Б. И., 1967.— 373 с.
|
Зеленин Ю. В. Председатель Харьковского общества гомеопатии и нетрадиционной медицины. Директор ЧФ"Гомеопат" врач-гомеопат
г.Харьков, ул. Пушкинская, 54/1 ст.м. "Архитектора Бекетова"
|
|