Тестостерон- IФА

Інструкція

по використанню тест-системи імуноферментної 

для визначення загального тестостерона в сироватцi та плазмi кровi

( Тестостерон- IФА)

                                                            Державний реєстраційний номер № 1247/2002      

Тiльки для дiагностики in vitro.

Набiр вироблений по технологiї та з компонентiв фiрми Хема-Медiка, Москва.

Введення

Тестостерон є найбільш важливим андрогенним і природним анаболiчним гормоном чоловiкiв та жінок. Нормальна секреція тестостерону необхідна для підтримки репродуктивної функції  чоловіків. Тестостерон контролює сперматогенез, функцію простати і потенцію, стимулює лібідо, впливає на ріст волосся і голос. У жінок тестостерон секретують яєчники і кора наднирків. Секреція тестостерону різко знижується після 50-60 років. У чоловіків недолік андрогенів може викликати уповільнене полове дозрівання, безплідність та імпотенцію. Гіперсекреція андрогенів у жінок може бути причиною гірсутизму з вирілізацiєю різного ступеня, часто в сполученні з олігоменореєю, аменореєю і безпліддям.

Визначення тестостерону використовується для оцінки функціонального стану репродуктивної системи людини, а також при деяких захворюваннях, зв’язаних з гормональними порушеннями.

Принцип визначення

У наданiй тест-системi використовується принцип конкурентного iмуноферментного аналiзу. У лунки мiкропланшета, на поверхнi якого адсорбованi специфiчнi анти-Тестостерон-антитiла, вносять дослiджуваний зразок та кон'югат Тестостерон-пероксидаза. Тестостерон iз зразка конкурує з кон'югованим антигеном за зв'язок з антитiлами на поверхнi лунки. Активнiсть ферменту, зв'язаного на поверхнi лунки мiкропланшету, проявляється i вимiрюється додаванням хромоген-субстратної сумiшi, стоп-розчину та фотометрiєю при 450 нм. Iнтенсивнiсть кольорової реакцiї зворотньо пропорцiйна кiлькостi специфiчних антитiл у зразку.

Склад набору :

1. Анти-Тестостерон IФА стрипи, 8х12 лунок ( 1 шт.)

2. Стрічка для закліювання стрипів (2 шт.)

3. Набiр калiбраторiв та контролiв, по 0.6 мл (всього 6 калiбраторiв:  0,1; 1; 5; 10 ; 20 ; 40 нмоль/л; та 2 контрольних зразка)

4. Концентрат вiдмиваючого розчина, 22 мл ( 1 фл.)

5. Кон'югат, 11 мл ( 1 фл.)

6. Субстрат , 11 мл ( 1 фл.)

7. Стоп-розчин, 11 мл ( 1 фл.)

Важливі зауваження по збереженню реагентів і виконанню тесту.

1. Не змішуйте і не використовуйте в одній постановці реагенти різних серій.

2. Після використання реагенту негайно закривайте кришку  флакона чи пробірки. Увага: закривайте кожен флакон своєю кришкою.

3. Усі компоненти набору повинні зберігатися в холодильнику (+2...+8^оС). Не заморожуйте набір.

4. Після розкриття пакета ретельно заклейте  лунки, що залишилися, стрічкою для закліювання, щоб запобігти впливу вологи пiд час зберiгання.

5. Увага! Під час всіх інкубацій необхідно заклеювати планшет клейкою стрічкою. Не допускайте пересихання лунок мікропланшета між стадіями постановки.

6. Усі проби і стандарти бажано ставити в двох паралелях (повторах).

7. Досліджувані сироватки повинні бути ретельно отцентрифуговані. Не використовуйте мутні, хильозні та гемолітичні зразки.

8. Якщо аналіз виробляється не в день узяття крові, сироватку варто зберігати при -20⁰С. Повторне заморожування-відтавання не допускається.

9.Відмивання мікропланшета може проводитися як вручну, так і з використанням автоматичних пристроїв. Вносите не менш 200 мкл відмивочного буфера у лунки при кожному відмиванні. Затримка при відмиванні («замочування») не потрібна. Після закінчення ручного відмивання різко перегорнiть мікропланшет на фільтрувальний папір для видалення залишків буфера.

10. Вимірюйте оптичну щільність протягом не більш 15 хвилин після зупинки реакції із субстратом

Підготовка реагентів

1. Усі реагенти (включаючи необхідне число стрипів) перед використанням повинні бути доведені до кімнатної температури (20-25°С).

2. Приготуйте відмиваючий розчин: для цього концентрат розбавте 10-кратним об’ємом дистильованої води в чистому посуді. Отриманий розчин стабільний протягом 2-х діб при кімнатній температурі чи 10 діб у холодильнику (+2...+8^°С).

Проведення аналiзу

1. Помістiть у рамку потрібну кількість стрипів - зразки в 2 повторах та 16 лунок для калiбраторiв та контрольних зразкiв.

2. Внесiть у лунки по 50 мкл калiбратора або дослiджуваного зразка.

3. Внесiть у лунки по 100 мкл розчина кон'югата.

4. Iнкубуйте 60 хвилин при температурi 20-25°C.

5. Вiдмийте стрипи 5 разiв вiдмиваючим розчином.

6. Внесiть у лунки 100 мкл субстратного розчина.

7. Iнкубуйте 15 хвилин при температурi 20-25° C.

8. Внесiть у лунки 100 мкл стоп-розчину.

9. Визначте оптичну щільність у лунках на фотометрі при довжині хвилі 450 нм, бланк фотометра виставляйте проти повітря.

Приклад калібровочної кривої ( вісь Х –конц.; вісь У – ОЩ  нмоль/л)

Очикуванні коливання  контольних зразків:	високий зразок	10 –20 нмоль/л
	низький зразок	2 – 8 нмоль/л