РФ - латекс-тест

Інструкція

по використанню діагностикуму латексного

для виявлення ревматоїдного фактору

в сироватці крові людини (“РФ - латекс-тест”)

(Державний реєстраційний номер № 1248/2002)

            Ревматоїдний фактор (РФ) –аутоантитіла IgG, IgM або IgA, що реагують з Fc-фрагментом IgG. Він утворюється в результаті стимуляції агрегованим модифіційованим (видозміненим) IgG або за рахунок екзогенного перехресно реагуючого антигену при порушенні імунорегуляції. Комплекс IgG+РФ не фагоцитується, відкладається в периваскулярному просторі, стимулюючи клітинно-опосередковані цитотоксичні реакції, що призводить до появи запалення.

Найбільше клінічне значення має визначення РФ IgМ, що може визначатися в реакції латексної аглютинації.

Підвищення рівню РФ характерно для ревматоїдного артриту (до 90% хворих), хоча можливі серонегативні форми. Підвищення титру РФ відзначається не раніше чим через 6-8 неділь після клінічних проявів. РФ в  більш низьких титрах може відзначатися при інфекційному мононуклеозі, гострих запальних процесах (бактеріальний ендокардит, сифіліс, туберкульоз, кір, краснуха, грип та ін.), вовчаку з ураженням суглобів, синдромі Шегрена, саркоїдозі, гепатиті, системній склеродермії, поліміозиті. 

Принцип методу

Оснований на виявлені в сироватці крові хворих ревматоїдного фактору (Ig M проти Fc- фрагменту Ig G), який вступає в реакцію аглютинації з інактивованим людським гама-глобуліном, що адсорбований на нейтральних частинках латексу.

Склад набору (реагенти)

1.      Реагент №1 - РФ- латексний реагент (2) мл

2.      Реагент №2 - Розчинник (10) мл

3.      Реагент №3 - Контрольний позитивний зразок (0,1) мл.

4.      Реагент №4- Контрольний негативний зразок (0,1) мл..

5.      Тестовий слайд (1шт)

Досліджуваний матеріал

            Використовують свіжу, вільну від домішок сироватку чи плазму крові. Зберігають зразки не більше 72 годин при +2+8⁰С. Довгострокове зберігання допускається в зомороженому вигляді при температурі мінус 20⁰С. Повторні заморозка та розтавання не рекомендуються.

            Використання гемолізованих та ліпідемічних зразків не рекомендуються. 

Підготовка реагентів та проведення дослідження

            Перед постановкою дослідження набор витримують при кімнатній температурі протягом 30 хвилин

.

1 Якісне визначення
Наносять на скляну пластинку чи тестовий слайд послідовно реагенти №3 - №4 по 10 мкл з інтервалом 2-3 см, потім на вільні місця наносять по 10 мкл досліджуваного матеріалу.
Легким струшуванням флакону перемішують реагент №1 і добавляють по 10 мкл в кожну краплю контрольного та досліджуваного матеріалу, перемішують скляною паличкою.

Похитують пластину протягом 3 хвилин. Оцінку результатів дослідження проводять через 5-6 хвилин. Більш пізню аглютинацію розцінють як неспецифічну.

2. Кількісне визначення

З допомогою реагенту №2 готують розведення досліджуваного матеріалу – 1:10,1:20, 1:40, 1:80 і т.д.

На скляну пластинку чи тестовий слайд наносять по 10 мкл кожного розведення досліджуваного матеріалу. Реагент №1 перемішують легким струшуванням флакону і до кожного розведення проби додають по 10 мкл. Перемішують скляною паличкою.

Похитують пластину протягом 3 хвилин, після чого проводять облік результатів дослідження, як вказано для якісного визначення.

Оцінка результатів дослідження

Реакцію вважають позитивною, коли спостерігається аглютинація частин латексу. Величину реакції оцінюють в плюсах: 4 плюси – всі частини аглютиновані, розчин прозорий; 3 плюси – ¾ частин аглютиновані, розчин прозорий по краю; 2 плюси – ½ частин аглютиновані, розчин мутнуватий; 1 плюс – слаба аглютинація, розчин мутний.          

При кількісному визначенні оцінку проводять згідно з останнім титром сироватки, який дав позитивний результат.

Для визначення кількості  РФ в МЕ/мл в пробі, необхідно найбільше розведення сироватки, що дало видиму аглютинацію, помножити на 6 МЕ/мл. Наприклад, якщо аглютинація спостерігалася в титрі досліджуваної сироватки 1:20, то необхідно 20Х6=120 МЕ/мл.

У здорових людей може визначатися до 12 МЕ/мл  РФ в сироватці крові .

Чутливість

Чутливість тесту становить 6 МЕ/мл. Стандартизація виконана по галузевому стандарту ДНВІ стандартизації та контролю медичних біологічних препаратів ім. Л.А.Тарасевича (Росія). 

Вимоги безпеки

1. Набор призначений тільки для діагностики in vitro. Категорично забороняється піпетування ротом.

2. Засобами індивідуального захисту при роботі з наборами є марлеві пов’язки  та гумові рукавички.

            3 Знезараження сироваток, тестових слайдiв чи скляних пластин проводити згiдно з наказом МОЗ СРСР №408 вiд 29.12.89 р. «О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране».

Умови транспортування та зберігання

1 Набори транспортують всіма видами закритого транспорту при температурі від +4 до +10⁰С. Допускається транспортування при температурі до 37°С не більше 72 годин.

2 Набори повинні зберігатися при температурі від +4 до +10⁰С. Не допускається замороження! 

Гарантії виробника 

            1 Виробник гарантує відповідність якості наборів вимогам цих ТУ при додержанні споживачем наведених у них умов транспортування та зберігання.

2 Гарантійний термін зберігання становить 1 рік від дня виготовлення набору. Після закінчення терміну зберігання набори підлягають переконтролю з метою перевірки їх працездатності.