Імуноглобуліни A, M, G – ІФА

Інструкція

по використанню тест-системи імуноферментної
для визначення вмісту імуноглобулінів A, M, G
в сироватці крові людини (“Імуноглобуліни A, M, G – ІФА”)

Державний реєстраційний номер № 1247/2002

            Імуноглобуліни являються продуктами секреції В-клітин на кінцевій стадії їх диференціювання, тобто плазматичних клітин. Дефекти, пов’язані з порушенням метаболізму імуноглобулінів, спостерігаються при багатьох захворюваннях. Зниження рівня імуноглобулінів свідчить про недостатність гуморальної ланки імунітету, порушення їх синтезу або посилення катаболізму, адсорбція на імунних комплексах. Підвищення рівня характерне для гострих та хронічних запальних процесів, аутоімунних захворюваннях та ін.

Принцип методу

Оснований на виявлені в сироватці крові імуноглобулінів A, M, G з допомогою специфічних антиглобулінових кон’югатів (анти- A, анти-M, анти-G). Компоненти, що не зв’язалися, відмиваються, а активність ферменту в складі імунних комплексів визначають з допомогою субстрат – хромогенної суміші. Інтенсивність покрашення хромогену зворотньо пропорційна кількості антитіл в зразку.

Склад набору

1.      Планшет полістироловий з імобілізованим антигеном (1-4 стрипи – Ig A, 5-8 – IgM, 9-12 -  IgG (1 шт).

2.      Стандартний зразок  (1 упак.).

3.  Буфер фосфатно-сольовий (ФСБ) (1 флакон).

4.      Цитратн-фосфатний буфер (ЦФБ) (1 флакон).

5.      Розчин субстрату (1 флакон).

6.      Кон’югати, мічені пероксидазою (анти- A, анти-M, анти-G) (1 набор).

7.      Зупиняючий розчин (1 флакон).

Досліджуваний матеріал

            Використовують свіжу, вільну від домішок сироватку. Зберігають зразки не більше 72 годин при +2+8⁰С. Довгострокове зберігання допускається в замороженому вигляді при температурі мінус 20⁰С. Повторні заморозка та розтавання не рекомендуються.

            Використання гемолізованих та ліпідемічних зразків не рекомендуються.

Підготовка реагентів 

1. Перед постановкою дослідження набор витримують при кімнатній температурі протягом 30 хвилин.

2. Готують необхідну кількість розчину ФСБ, для чого розводять його в 10 раз дистильованою водою. При випаданні солі в осад в концентраті необхідно прогріти його при 30-40°С до повного розчинення осаду. Приготовлений розчин використовують для розведення сироваток та промивання планшетів.

3.        Підготовку робочих розчинів кон¢югатів: анти А-ПХ  50 мкл кон¢югату розводять у 5 мл ФСБ (розведення 1:100); анти М-ПХ 20 мкл кон¢югату розводять у 6 мл ФСБ (розведення 1:300);  анти G- ПХ 30 мкл кон¢югату розводять у 6 мл ФСБ (розведення 1:200).

При постановці реакції тільки на частині планшету кількість розчину кон¢югату зменшуеться пропорційно. Робочий розчин кон¢югату готують безпосередньо перед використанням!

4. Підготовка субстратної суміші: до 9 мл дистильованої води добавляють 1мл концентрованого ЦФБ і 1 мл ТМБ-розчину. При постановці реакції тільки на частині планшету кількість субстратної суміші зменшується пропорційно. Робочий розчин субстратної суміші готують безпосередньо перед використанням!

5. Підготовка стандартного зразку: 5 мкл стандарту розводять в 1 мл ФСБ. Вміст имінуглобулінів в стандартному зразку:  IgA -___2,03__г/л, IgM -__1,38___г/л, IgG - _11,83____ г/л.

6. Підготовка досліджуваних зразків: перед дослідженням сироватки розводять ФСБ в 200 разів (5 мкл в 1 мл).

Проведення дослідження

1. В ямки  стрипів вносять відповідно по 100 мкл розчину ФСБ, стандартного та досліджуваних зразків в 2-х повторах.

                  2. Потім в ямки всіх стрипів вносять по 100 мкл відповідних кон’югатів.

      3. Інкубують стрипи протягом 60 хв. при  кімнатній температурі, періодично струшуючи, або на шейкері.

      4. Промити планшет 4-5 разів ФСБ, добавляючи в ямки по 200 мкл розчину.

      5.В ямки промитого планшету вносять по 100 мкл субстратної суміші і інкубують в захищеному від світла місці 15-20 хвилин в залежності від ступеню розвитку окрасу. Зупиняють реакцію добавлянням в кожну ямку планшету по 100 мкл зупиняючого розчину.

      6.Не більше як через 5-10 хвилин міряють оптичну щільність в ямках планшету на аналізаторі імуноферментному при довжині хвилі 450 нм.

Оцінка результатів дослідження

            Міряють оптичну щільність (ОЩ) в усіх ямках і проводять розрахунки, використовуючи зворотню пропорційну залежність:

Сх  =    ОЩ к ´ Ск

               ОЩх

Де ОЩк – оптична щільність стандартного зразку, Ск – концентрація імуноглобуліну в стандартному зразку, ОЩх – оптична щільність досліджуваного зразку, Сх – концентрація імуноглобуліну в досліджуваному зразку.

 
                                                                                      Вимоги безпеки

1. Набор призначений тільки для діагностики in vitro. Категорично забороняється піпетування ротом.

2. Засобами індивідуального захисту при роботі з наборами є марлеві пов’язки  та гумові рукавички.

3.      Знезараження сироваток проводити згiдно з наказом МОЗ СРСР №408 вiд 29.12.89 р. «О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране».

Умови транспортування та зберігання

1 Набори транспортують всіма видами закритого транспорту при температурі від +4 до +10⁰С. Допускається транспортування при температурі до +37⁰С не більше 72 годин.

2 Набори повинні зберігатися при температурі від +4 до +10⁰С. Не допускається замороження!

Гарантії виробника

1 Виробник гарантує відповідність якості наборів вимогам цих ТУ при додержанні споживачем наведених у них умов транспортування та зберігання.

2 Гарантійний термін зберігання становить 6 місяців від дня виготовлення набору.  Після закінчення терміну зберігання набори підлягають переконтролю з метою перевірки їх працездатності.

3 Термін придатності стрипів після розкриття пакету становлює 1 місяць при температурі 2-8˚ С. Невикористані стрипи зберігають у щільно закритому пакеті !

Увага!

            1.  Перед постановкою дослідження набор витримати при кімнатній температурі протягом 30 хв.

            2. Перед роботою розкрити пакет, відрізавши запаяну смугу. Діставши необхідну кількість стрипів, щільно закрити за допомогою застібки (“зіпера”) для запобігання утворення конденсату та попадання вологи.